[转载]iTRAQ技术

蛋白质组学研究：就是要把一个基因组表达的全部蛋白质或一个复杂的混合体系中所有蛋白质进行精确的定量和鉴定。
蛋白组学研究方向分为：蛋白质表达差异和表达量的变化。
定量蛋白质组学是蛋白质研究的前沿学科，目前常用的定量蛋白质组学研究技术有荧光差异凝胶电泳（DIGE）、同位素亲和标记（ICAT）等，同位素标记相对和绝对定量（iTRAQ）技术是近年来最新开发的一种基于非胶体系运用质谱进行定量的蛋白质组学研究技术，在国内外广泛应用。

 　　研究不同生理条件下细胞内蛋白质的含量和状态变化是比较蛋白质组学的核心内容。要揭示上述动态过程往往需要进行多个样品的同步比较分析。近年来，在体内和体外同位素标记基础上，用多维液相色谱分离多肽，进而用串联质谱进行相对定量的分析方法已成为高通量比较蛋白质组研究的主要手段之一。iTRAQ标记-串联质谱分析技术是目前唯一一种可以进行四重蛋白质样品同步比较的相对定量技术。

实验设计：样本制备、蛋白质同位素标记、高效液相分离、MS质谱分析、数据检索

iTRAQ技术依托于溶液同位素标记体系，利用同位素质量标签对蛋白质进行标记，使具有相同的离子化能力，将标记蛋白质混合起来，应用液相色谱与质谱串联进行分析，可以通过比较质谱峰的强弱得到相对定量的数值。  

►  可同时对4个样品进行蛋白差异分析，节省样品的用量和检测的时间
►  二级碎片离子信号增强，产生质量更高的二级质谱，确保鉴定结果高的可信度
►  可进行多个时间点、细胞周期、细胞信号传导整个过程蛋白质组动态变化的监测
►  可分析详细分期型的临床疾病样本，并可设计样本重复，甚至可以进行个体样本的研究

iTRAQ技术主要特点：
1.分离能力强、分析范围广
2.定性分析结果可靠，可以同时给出每一个组分的分子量和丰富的结构信息
3.MS具备高灵敏度、检测限低
4.分析时间快，分离效果好
5.自动化程度高
6.iTRAQ技术不仅可发现胞浆蛋白，还有膜蛋白、核蛋白、胞外蛋白
iTRAQ技术可检测出低丰度蛋白、强碱性蛋白、小于10KD或大于200KD的蛋白
iTRAQ 技术是由美国应用生物系统公司(Applied Biosystems Incorporation，ABI)2004年开发的同位素标记相对和绝对定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技术，是一种新的、功能强大的可同时对四种样品进行绝对和相对定量研究的方法，这种方法是建立在iTRAQ试剂的基础上。